Alternaria alternata inülinazının saflaştırılması ve karakterizasyonu
Küçük Resim Yok
Tarih
2002
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Trakya Üniversitesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
ÖZET Bu çalışmanın kapsamında, Alternaria alternata' dan inülinaz enziminin üretilmesi, üretim şartlarının inülinaz aktivitesi üzerine etkileri, enzimin saflaştırılması ve bazı biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Alternaria alternata' dan inülinaz enziminin üretim şartlarının inülinaz aktivitesi üzerine etkileri araştırıldığında, üretim süresi 2 gün, üretim sıcaklığının 30 °C, başlangıç pH' mm 6.0 olduğu saptanmıştır. Üretim ortamına eklenen C ve N kaynaklarının inülinaz aktivitesine etkisi araştırıldığında, en yüksek aktivite %1 inülin içeren ortamda görüldü, NH4H2PO4' m kullanılan diğer azot kaynaklarından daha iyi bir kaynak olduğu, kombine uygulamada ise, NH4H2PO4 ve NH4NO3 'ün birlikte bulunduğu ortamda en yüksek inülinaz aktivitesine ulaşıldığı belirlendi. Enzimin optimum çalışma koşulları incelendiğinde, inkübasyon pH 'mm 5.0, inkübasyon sıcaklığının 30 °C olduğu gözlendi. A. alternata inülinazı, diyaliz, deriştirme, jel filtrasyonu (Sephadex G-150) ve iyon değiştirici (DEAE-Cellulose) k roma tog rafi yöntemleri kullanılarak 65.89 kez saflaştırıldı, sataştırılan enzimin inülin için Km değeri 0.52 mM, Vmax değeri ise 8.69 mmol/ml/dk olarak hesaplandı. A. alternata inülinazının pH ve termal kararlılığı incelendiğinde, enzimin pH:4-6 aralığında kararlı olduğu ve aktivitesini 30-40 °C aralığında koruduğu belirlendi. 5 mM KCN' nin % 72.83 ve 5 mM DTNB' nin % 81.89 ile en yüksek inhibisyona neden olduğu, uygulanan tüm metal iyonlarının enzimde inhibisyon meydana getirdiği, 5mM' lık MnCfe' ün enzim aktivitesini tamamen inhibe ettiği bulundu. A. altenata inülinazının molekül ağırlığı SDS-PAGE ile 66.000 Da ve sephadex G-150 jel filtrasyonu ile 68.000 Da olarak tespit edildi ve A. alternata inülinazı ile inülinin hidrolizi ürünü fruktoz olduğundan, bu sonuç A. alternata inülinazının exo tip etki gösteren bir enzim olduğu ileri sürmektedir. Anahtar Kelimeler: İnülinaz, Saflaştırma, Alternaria alternata
II ABSTRACT This study was undertaken to obtain production of Alternaria alternata inulinase, the effect of production conditions on inulinase activity, enzyme purification and also to determine its some biochemical properties. When the effect of production conditions on the inulinase activity were examined, the enzyme activity have demonstrated that was maximum when the production time was 2 days, at a temperature 30 °C with the initial pH 6.0. When the effect of addition of different C and N sources in the medium on inulinase production were investigated, the enzyme activity was maximum in media containing %1 inulin. NH4H2PO4 were found to be better nitrogen sources than using other ones for Alternaria alternata. Among nitrogen sources NH4H2PO4+NH4NO3 combinations had higher inulinase yields than the other nitrogen sources. The optimum conditions found for enzyme substrate mixture are as fallows: incubation pH 5.0 temperature 30 °C. A. alternata inulinase was purified 65.89 times by using dialysis, concentrating, gel filtration (Sephadex G-150) and ion exchange chromatography (DEAE-cellulose) techniques. The Km and Vmax values of inulinase for inulin were 0.52 mM and 8.69 mmol/ml/dk respectively. The enzyme was active between 30-40 °C and at pH 4.0-6.0 in the pH and thermal stability studies. The enzyme activity was inhibited strongly by KCN (5 mM) and DTNB (5mM). KCN and DTNB caused decreasing in inulinase activity by % 72.83 and % 81.39 respectively. When added to the assay mixture activity by causing inhibition and enzyme activity were completely inhibited by MnCfe. The molecular weight of A. alternata inulinase 66.000 and 68.000 Da by SDS- polyacrylamide gel electrophoresis and gel filtration on sephadex G-150 respectively. The hydrolysis products of inulin by the A. alternata inulinase were fructose. This result strongly suggested that the exo-type inulinase from A. alternata. Key words: inulinase, purification, Alternaria alternata
II ABSTRACT This study was undertaken to obtain production of Alternaria alternata inulinase, the effect of production conditions on inulinase activity, enzyme purification and also to determine its some biochemical properties. When the effect of production conditions on the inulinase activity were examined, the enzyme activity have demonstrated that was maximum when the production time was 2 days, at a temperature 30 °C with the initial pH 6.0. When the effect of addition of different C and N sources in the medium on inulinase production were investigated, the enzyme activity was maximum in media containing %1 inulin. NH4H2PO4 were found to be better nitrogen sources than using other ones for Alternaria alternata. Among nitrogen sources NH4H2PO4+NH4NO3 combinations had higher inulinase yields than the other nitrogen sources. The optimum conditions found for enzyme substrate mixture are as fallows: incubation pH 5.0 temperature 30 °C. A. alternata inulinase was purified 65.89 times by using dialysis, concentrating, gel filtration (Sephadex G-150) and ion exchange chromatography (DEAE-cellulose) techniques. The Km and Vmax values of inulinase for inulin were 0.52 mM and 8.69 mmol/ml/dk respectively. The enzyme was active between 30-40 °C and at pH 4.0-6.0 in the pH and thermal stability studies. The enzyme activity was inhibited strongly by KCN (5 mM) and DTNB (5mM). KCN and DTNB caused decreasing in inulinase activity by % 72.83 and % 81.39 respectively. When added to the assay mixture activity by causing inhibition and enzyme activity were completely inhibited by MnCfe. The molecular weight of A. alternata inulinase 66.000 and 68.000 Da by SDS- polyacrylamide gel electrophoresis and gel filtration on sephadex G-150 respectively. The hydrolysis products of inulin by the A. alternata inulinase were fructose. This result strongly suggested that the exo-type inulinase from A. alternata. Key words: inulinase, purification, Alternaria alternata
Açıklama
Bu tezin, veri tabanı üzerinden yayınlanma izni bulunmamaktadır. Yayınlanma izni olmayan tezlerin basılı kopyalarına Üniversite kütüphaneniz aracılığıyla (TÜBESS üzerinden) erişebilirsiniz.
Doktora
Doktora
Anahtar Kelimeler
Biyoloji, Biology
