Yazar "Öztürk, Aslı Hilal" seçeneğine göre listele

Listeleniyor 1 - 1 / 1
  • Küçük Resim
    Öğe
    Leucojum aestivum N4OMT geninin izolasyonu ve klonlanması
    (Trakya Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, 2023) Öztürk, Aslı Hilal; Hasançebi, Semra
    Bu araştırmada, Leucojum aestivum bitkisinden norbelladine 4’-O-metiltransferaz (N4OMT) enzimini kodlayan genin, izolasyonu ve klonlanması yapılmıştır. L. aestivum, Trakya bölgesinde yayılım gösteren çok önemli bir tıbbi bitkidir ve özellikle likorin ve galantamin olmak üzere farmakolojik açıdan önemli bazı alkaloitlerin doğal üreticisidir. Bitkinin ürettiği bir Amarylldacaea alkoloidi olan galantamin, sinir sistemini etkileyen, başta Alzheimer olmak üzere önemli bazı nöredejeneratif hastalıkların tedavi sürecinde kullanılan değerli bir sekonder metabolittir. Norbelladin 4’-O-metiltransferaz (N4OMT), galantamin sentez yolağında, başlangıç aşamasındaki önemli adımlardan biri olan norbelladini, 4'-0-metilnorbelladine katalizleyen enzimdir. Bu nedenle N4OMT geni, galantamin üretiminin artırılmasına yönelik metabolik mühendisliği çalışmaları için hedef niteliğindedir ve genin izolasyonu, klonlanması ve karakterize edilmesi önemlidir. Tez kapsamında, önce galantamin üreticisi yakın akraba türlerden N4OMT genine ait DNA dizilerinden ve 2022 yılında yayınlanan L. aestivum N4OMT (LuaN4OMT) gen dizisinden yararlanılarak gene özgü primerler tasarlanmıştır. Ardından bitkinin çiçek dokularından total RNA izole edilmiş, elde edilen total RNA’lardan ters transkripsiyon işlemi ile cDNA sentezlenmiştir. Tasarlanan primerler kullanılarak cDNA’dan LuaN4OMT geni çoğaltılmış ve bir klonlama vektörü olan pJET.Blunt/1.2’ye bağlanmıştır. Ardından hazırlanan rekombinant vektör, E. coli’ye transfer edilmiş ve olası transformant koloniler, PCR ile doğrulanmıştır. PCR ürünleri, jelden geri kazanılarak, Sanger dizileme yapılmıştır. Dizileme sonucu, klonlanan genin LuaN4OMT olduğunu doğrulamıştır.